Метод иммуноферментного анализа

Иммуноферментный анализ крови — метод лабораторного определения специфической реакции между антителом и антигеном. Последний — любое вещество, которое организм рассматривает как чужеродное или потенциально опасное, против него организм обычно начинает вырабатывать собственные иммуноглобулины. Антитела, в свою очередь, образуют прочные связи с соответствующим антигеном, а также иммунные комплексы, с последующим их удалением из организма, благодаря чему выполняют свою защитную функцию

Цель этого исследования — диагностическая: определение характерных иммуноглобулинов к возбудителям инфекционных, вирусных и других патологических процессов, происходящих в организме.

Этот метод диагностики получил широкое применение не только в медицине, но и сельском хозяйстве, биохимической и пищевой промышленности и микробиологии.

Анализ крови

  • нарушении иммунитета,
  • онкологических заболеваниях,
  • вирусных патологиях,
  • аллергической реакции,
  • болезнях, передающихся половым путем,
  • комплексном обследовании перед операционным вмешательством,
  • определении уровня гормонов,
  • оценке эффективности проводимого лечения,
  • динамическом развитии недуга,
  • глистной инвазии.

ИФА

Преимущества

С помощью этого метода специалистам удается достоверно устанавливать причины патологических состояний, их стадию и эффективность терапии. Возможность определения прочности связи между антигеном и антителом позволяет выявить ориентировочную дату заражения, что помогает выяснить длительность протекания процесса. Также к преимуществам этого метода можно отнести его простоту, возможность автоматизации всех этапов анализа и высокую чувствительность, позволяющую определять очень маленькие концентрации до 0,05 нг/мл.

Гемотест на глистные инвазии, при отсутствии симптоматики, является эффективным для определения наличия паразитов, их количества (даже не значительного, которые не обнаруживаются другими методами диагностики) и динамики эффективности лечения.

Единственным недостатком этого иммуноферментного анализа можно считать невозможность выявления возбудителя инфекции, а лишь подтверждение его наличия или отсутствия.

Подготовка

Перед проведением иммуноферментного анализа нужно отказаться от чрезмерных физических нагрузок, нельзя употреблять алкоголь и курить. Посоветовавшись с врачом, прекратить прием препаратов (за 16 дней до сдачи). Перед исследованием нужно выспаться. Женщинам при взятии анализа на гормоны, необходимо сообщить о фазе цикла, так как полученные значения разнятся в зависимости от стадии. Кровь сдается из локтевой вены строго натощак (за 12 часов желательно не есть), 3-5 мл являются достаточным количеством для тщательной диагностики.

Читайте также:  УЗИ мочевого пузыря

Самым часто используемым материалом для проведения иммуноферментного анализа является кровь пациента, но также могут быть использованы: спинномозговое вещество, выделения из уретры и цервикального канала, слизь, околоплодные воды, жидкость стекловидного тела глаза.

В лаборатории из крови, взятой у пациента, выделяют сыворотку, которую можно хранить при температуре 2-8°С до 72 часов.

Если в течение этого времени исследовать плазму невозможно, то можно ее заморозить.

Единицы измерения

ИФА характерны следующие измерения:

  • Для качественной оценки используются символы «+» и/или «-».
  • С целью постановки диагноза указываются титры сывороток 1:20, 1:40, 1:100 и другие.
  • Концентрация антител в единице объема сыворотки — оптическая плотность, чем она выше, тем больше их в пробе (нг/мл).

Автоматические пипетки, термостат и спектрофотометр, планшеты тест-систем — это, то оборудование, которое необходимо для качественной лабораторной диагностики и точности получаемых результатов.

Методы проведения анализа

Специалисты могут провести ИФА несколькими методами.

  • Прямой (твердофазный анализ). Антитела вырабатываются в В-лимфоцитах, на поверхности которых находится большое число рецепторов, они распознают чужеродный агент. Антиген, в свою очередь, встретившись с родственным ему нервным окончанием, присоединяется к нему. После селекции В-лимфоцит трансформируется в плазматическую клетку и образует себе подобные клоны, каждый их которых вырабатывает антитела специфичные для этого антигена, в результате чего образуется множество иммунных комплексов, они с помощью специальных «меток» распознаются в лабораторных условиях. Существует несколько разновидностей анализа.
  • Прямой неконкурентный метод. На специальный лабораторный планшет помещают очищенный антиген возбудителя инфекции и к нему добавляют биоматериал обследуемого пациента, иммуноглобулины которой помечены ферментом пероксидазой. Добавляют специфический хромоген. Начинается реакция между антигеном и антителом, в результате которой образуется окрашенное соединение. По интенсивности окрашивания, которая зависит от количества иммуноглобулинов, находящихся в организме, происходит оценка результатов.
  • Непрямой неконкурентный. Занимает больше времени, но при этом является более точным. Сегодня чаще используется именно этот метод иммуноферментного анализа.
    • На первом этапе исследуемый биоматериал помещают в лунки планшета и оставляют на 15-30 минут для прикрепления к ним антигена. После этого в лунки добавляют соответствующие антитела и оставляют для связывания с антигеном до 5 часов. По прошествии времени выливают содержимое лунок, промывая их специальным раствором, тем самым удаляют не связавшиеся вещества с иммуноглобулином.
    • На втором этапе в лунки добавляют антитела, содержащие конъюгат и опять оставляют на 15-30 минут, чтобы они связались с ранее внесенными, не мечеными, в результате образуется комплекс антитело-антитело-антиген. После опять делают промывку для удаления не связавшихся компонентов. Добавляют специальное вещество, которое способствует окрашиванию «метки» в течение 5-30 минут. В результате изменения цвета определяют концентрацию антигена, так как его количество равно количеству искомых антител, а они, в свою очередь, равны меченым
  • «Сэндвич». Является разновидность непрямого имунноферментного анализа с тем отличием, что изначально на стенках лунок закрепляется антитело, затем вносится исследуемый материал, содержащий комплементарный антиген. После промывки добавляется меченое антитело, в результате образуется комплекс антитело-антиген-антитело. Количество с «меткой» оказывается равным.
  • Прямой конкурентный метод. В лунки планшета, на стенках которого уже сорбирован антиген, добавляют антитела, содержащие метку, и исследуемый биоматериал, содержащий определяемые иммуноглобулины. Между ними образуется конкуренция за образование иммунокомплексов. После отмывки добавляют реагент и определяют ферментативную активность образовавшихся комплексов на твердой фазе. Величина сигнала обратно пропорциональна концентрации антигена.
  • Непрямой конкурентный. В этом методике используют меченые антитела и антиген-белок — носитель, иммобилизованный на твердой фазе. Антитела связываются с антигеном исследуемой сыворотки или с антигенами на твердой фазе. Если в сыворотке окажется много исследуемого вещества, то сигнал от антител будет слабым, так как большая часть комплексов удалится при промывке. Таким образом, чем выше сигнал, тем меньше концентрация определяемого антигена.
Читайте также:  Анализы, необходимые для уточнения диагноза «цирроз печени»

Иммуноглобулины и их значение

Иммуноглобулин Значение Норма M (IgM) Первыми вырабатываются при попадании в организм опасного агента. Обнаружить их можно в течение первых шести недель от момента появления антигена, после чего они начинают исчезать. В норме эти антитела составляют 10%. G (IgG) Вырабатываются через несколько дней после появления IgM и надолго остаются в организме, препятствуя повторному заражению. В норме их 75%. E (IgE) Появляются в крови только при попадании в организм аллергена. Их повышение говорит о склонности к аллергическим реакциям. A (IgA) Находятся в слизистых оболочках мочеполовых и дыхательных путей, в секрете слюнных и слезных желез, осуществляют их защиту от воздействия чужеродных агентов. Их нормальная концентрация не более 20%. D (IgD) Их функция в организме остается до конца не изученной. По некоторым данным они участвуют в формировании местного иммунитета, образуясь в лимфатических узлах и миндалинах Концентрация в крови составляет около 1%.

Для иммуноферментной диагностики наиболее важными в выявлении патологического процесса и его давности является титр IgG, IgA, IgM.

Антитела

Качественное определение

Иммуноглобулин M Иммуноглобулин G Иммуноглобулин A Стадия — — + 2 недели от инфицирования + — + 2,5-3 недели от инфицирования + + + 3-4 недели от инфицирования — + + Обострение хронической фазы — + +/— Хроническая фаза — + — Излеченная инфекция — После эффективного лечения через 4—6 недель. Концентрация снижается в 4-8 раза. После эффективного лечения концентрация снижается 2-4 раза. Выздоровление — — — Отрицательный результат

После качественного метода определения антител может быть исследована их количественная составляющая, в которой пациент без помощи специалиста не разберется, да это и не требуется, так как врач на основе результатов проведенного анализа с учетом клинических проявлений поставит, при необходимости, правильный диагноз и необходимую фармакотерапию.

При проведении исследования на женские половые гормоны, необходимо учитывать фазу цикла:

Фаза День цикла Нормальное количество лютеинизирующего гормона

(мЕд/л) Фоликулярная 1-13 день 3-18 Овуляционная 13-15 день 25-160 Лютеиновая С 15 дня и до 1 дня фоликулярной фазы 4-18

Читайте также:  Выявление микобактерий туберкулеза в мокроте

При отсутствии патологических состояний, количество половых гормонов у мужчин 0,4-9 мЕд/л.

У детей в норме при исследовании аутоиммунные тела и антинуклеарный фактор не определяются, а антистрептолизин до 5 лет менее 110 Ед/мл, от 5 до 15 —150-300 Ед/мл, от 15 и старше не более 250 Ед/мл.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Все о зависимостях и вредных привычках человека
Adblock
detector